在生物医疗研究中，细胞融合技术是关键的实验方法之一。常见的细胞融合技术有转动法和离心法，通常将脾细胞与骨髓瘤细胞的比例设定在1:1至10:1之间，而3:1或5:1的比例最为普遍。

1. 所需试剂与材料

(1) 供融合用的脾细胞及骨髓瘤细胞。

(2) 1640培养液100ml。

(3) 完全1640液100ml。

(4) 25% FCS-1640液50ml。

(5) HAT培养液100ml。

(6) 50% PEG：取分子量4000的高纯度PEG 10g，放入25ml瓶中高压灭菌。使用前预热40℃的1640液10ml与PEG等量（W/V）混合，以酚红检查pH，通常无需调整pH。如pH值变化，可用HCl或NaHCO3进行调整。

(7) 10ml和50ml的灭菌沉淀管或瓶。

(8) 40孔塑料培养盘。

2. 操作步骤

（1）准备脾细胞。

（2）在50ml沉淀管中混合108脾细胞与107小鼠骨髓瘤细胞，添加50ml 25% FCS-1640液。

（3）在室温下以400g离心3分钟使细胞沉淀。

（4）去除上清液。

（5）轻轻敲打管底使沉淀松动，将沉淀管放入40℃水浴中以达到融合温度。

（6）缓慢加入预热至40℃的50% PEG 8ml，用1ml吸管滴加，同时摇动沉淀管，观察到颗粒生成，这一过程需持续约2分钟。

（7）加入1ml 1640液，同样边加边摇动，持续1分钟。

（8）重复以上第（7）步。

（9）再加入1ml 1640液，边加边摇动，持续0.5分钟。

（10）重复第（9）步。

（11）加入15ml 1640液。

（12）室温下，以400g离心1分钟使细胞沉淀。

（13）去除上清，轻轻敲打管底，加入25ml含有HAT的完全1640液。

（14）在前一天已经接种了饲养细胞的40孔塑料培养盘中，每孔滴加1滴（约0.05ml）融合细胞液。

（15）轻摇混合后，放入5% CO2饱和湿度的37℃培养箱中培养。

（16）在第3、6、9及10天更换为含HAT的完全1640培养液。注意轻轻吸取上清液，避免损失固定在孔底的细胞，并根据需要添加适量的饲养细胞。

（17）在第12和15天再次更换为含HAT的完全1640培养液。每次换液前用倒置显微镜观察，大约在10天左右可观察到杂交瘤细胞的生长。多数杂交瘤细胞在10至20天内可见，但有些可能需要约1个月。杂交瘤细胞出现后，应吸取上清液以检查抗体。

（18）对持续生长的杂交瘤细胞进行增殖传代。在此过程中，可根据情况取消HAT液和完全1640液，改用10% FCS-1640液。同时进行液氮保存及克隆化，每代都需检测抗体，以防止抗体细胞的变异与丢失。

通过以上方法，您可以有效进行细胞融合实验，并与PG电子一同优化实验流程，提高科研效率。